宁波实验室装修PCR实验室为什么要三区隔离？

宁波实验室装修PCR实验室为什么要三区隔离？

宁波实验室装修PCR实验总是假阳性的，显然没有模板，但最终扩展了产品。如果这种现象经常发生，请注意操作环境。

这涉及到气溶胶的概念。气溶胶是一种由固体或液体小质点分散并悬浮在气体介质中的胶体分散系统，可在空气中停留至少几个小时。

PCR反应过程中，液体蒸发冷凝，PCR管内部分空气形成气溶胶，携带大量气溶胶DNA扩展产品(注意，1ng扩展产品可用作模板DNA片段数，超过1ng可在起始模板中扩展DNA片段数量是数百万倍甚至更高。例如，人类基因组DNA有30亿个bp，要扩展的单拷贝基因片段bp，1ng起始模板可以用作模板DNA片段只占总起始模板DNA总量的千万分之一)。如果在实验室打开含量PCR扩大产品管盖，携带大量管盖DNA气溶胶扩散到空气中，从而污染环境。

虽然在整个空间环境中DNA含量很低，但理论上只有一个可以用作模板DNA片段也能PCR扩张成功，这就是为什么在污染环境中阴性对比也可以扩展条带。所以在专业PCR实验室(如临床PCR检验实验室通常需要四个区域的隔离（或至少三个区域的隔离）。常见的三个区域是指：

1.试剂配制区：PCR配制区域的反应系统。

2.标本处理区：包括制备扩展模板，即提取DNA的地方。

3.PCR扩展及产物分析区：PCR扩展区也是凝胶电泳分析扩展产品的区域。

如果将PCR扩展区和产品分析区再次分离，即四区隔离。四区隔离的主要目的是防止气溶胶在各个区域中PCR区域间流动的最佳方式是每个区域隔一栋楼，但操作不现实，因此有一种方法可以为不同区域设置正负压：

试剂配制区(Ⅰ区):最干净的区域，保持微正压，使外部空气无法进入隔离污染源。此外，该区域应增加阴性模板PCR严禁在此区域打开管并盖。.存放装有DNA离心管模板。

DNA模板添加区(Ⅱ区):压力比Ⅰ区域低，保证内部空气不泄漏，避免阳性模板气溶胶污染外部环境。

扩增及PCR产物分析区(Ⅲ区):保持负压，防止内部空气泄漏，以免扩大产品的气溶胶污染外部环境。

压力遵循Ⅰ区→Ⅱ区→Ⅲ区单向进行，不可逆向进行。

既然PCR三区隔离的目的是阻断气溶胶的交流，请注意以下细节，思考气溶胶的来源：

1.宁波实验室装修各区域应配备专用移液器，不得交叉混用。我们的一个用户在电泳室里加了一个移液器模板，阴性对比扩展了明亮的条带。

2.各区域应配备专用移液吸头，不得交叉混用。

3.如果条件允许，在PCRⅢ工作结束后，再次进入PCRI实验服需要更换.一次性鞋套.帽子.手套。

4.在PCRI区.PCRⅡ区域配吸头的区域。